使用色氨酸荧光进行溶菌酶的构象分析

• 医疗与生命科学

蛋白质内的色氨酸残渣受紫外线激发可产生本征荧光。当蛋白质从折叠的自然状态进入变性状态的时候，发射光谱将轻微变化，反映了折叠构型的变化。

目的：

测定溶菌酶中处于天然态和变性状态色氨酸的本征荧光。

为了进行这个分析，对溶菌酶的天然和变性状态本征荧光进行了测量。溶菌酶为14.3 kDa 蛋白质，具有6色氨酸残基。色氨酸的激发波长为280 nm，发射波长350 nm。

实验条件：

下列样品送交分析：

• 0.5 mg/mL溶菌酶的K2HPO4溶液50 mM，pH值：7.4 -天然蛋白质
• 0.5 mg/mL溶菌酶的 K2HPO4溶液，pH值：7.4，6 M胍HCl -变性蛋白质
• 50 mM K2HPO4，pH值：7.4，50 mM K2HPO4，pH值：7.4，6 M胍HCl 

将数毫升的溶菌酶溶液转移到一个石英试管，光程长1 cm。用UV-LVF-L滤光片使激发一侧300 nm以下的光通过。同时对缓冲剂的荧光进行了测量，以确保它们在使用条件下不发出荧光。

使用的硬件：

• USB2000 (USB2E4066) 光栅1
• UV2/OFLV-4探测器
• L2透镜
• 200 um光阑
• PX2脉动氙灯光源
• CUV-FL-DA 直插式试管托架
• UV-LVF-L UV低通线性可变滤波器
• CVD-DIFFUSE
• P600-2-UV-VIS（紫外线-可见光）
• 石英试管（CV-Q-10）

实验参数：

• 积分时间（ms）：500
• 光谱平均值：10
• 平滑次数：10

测量模式：

• 荧光

结果：

图1为天然和变性的溶菌酶溶液和缓冲剂测量的荧光光谱。注意：与蛋白质的折叠状态相关的荧光存在轻微的频变。